采购需求科室

结核病防治科

采购方式

询价采购

最高限额（元）

50000

投标人资质要求★

注意：提供明确、具体的资质要求（设置的投标人资质要求必须提交有法律法规依据，且不具备倾向性）。

1、供应商必须是在中华人民共和国国内注册的具有合法经营资格的国内独立法人并具有相关资质；

2、本项目不接受联合体报价，不允许分包；

3、供应商必须承诺参与本项目投标前三年内，在经营活动中没有重大违法记录，以及参与本项目采购活动时不存在被有关部门禁止参与政府采购活动且在有效期内的情况（提供承诺函）。

具体技术要求★

注意：提供服务总体要求、服务标的（如人员、车辆、检测对象、管理对象）数量情况、详细具体的服务需求内容及工作量情况（以能给供应商准确的报价依据，使不同供应商的项目报价不至于差距过大作为判断需求“详细具体”的标准）。

技术要求应包含以下内容：

一、项目背景：

为了推动学科发展，提升科室科研水平，同时为重点学科方向二“通过结核病发病机制研究发掘早期诊断潜在分子标志物及其临床应用”的确立提供依据，拟开展“血浆来源外泌体在结核病诊断中的作用研究”，计划先行开展预实验共18例（患病组6例、潜伏感染组6例、健康对照组6例）。

二、技术要求：

1、项目开展必须具备的条件

（1）供应商须具有国际公认的成熟应用的外泌体超离平台，外泌体鉴定平台，miRNA测序平台和QPCR技术服务平台，具备超速离心机，电镜，透射电镜、粒径分析仪，高通量测序仪，384孔QPCR仪，并既往承担过外泌体分离鉴定，外泌体miRNA测序，外泌体miRNA的荧光定量QPCR项目（做出承诺，格式自拟）。

2、服务内容及工作量：（详见附件1）

3、工作要求

（1）外泌体分离鉴定，工作内容包括电镜检测外泌体完整性（3张100nm、1张200nm、1张500nm、1张1000nm），粒径分析外泌体大小。

（2）外泌体分离和miRNA抽提质检，工作内容包括用超速离心机对血浆进行外泌体分离，分离好的外泌体进行miRNA抽提，对RNA进行质检。

（3）外泌体miRNA测序，工作内容包括miRNA定量，带UMI的miRNA文库构建，上机测序，数据分析等；要求原始数据20M reads，测序数据要求：

a) 测序得到的原始数据以fastq格式的文件进行存储。原始数据需经过引物与 adaptor 序列去除，并经过对测序片段碱基的质量检验和长度筛选及UMI筛选，最终选择质量可靠的测序片段。

b) 得到clean reads后，采用mirdeep2软件比对到 miRBase 数据库中对应物种上，得到 miRNA 的原始 counts 数。最后利用 UMI-tools 对实验中加入的 UMI 序列标签进行去重。  

c) miRNA 表达量计算采用 edgeR 包中的 CPM 函数计算度量指标（counts per million），提供表达结果注释表格、样本相关性分析图、PCA图。

d) 采用edgeR软件包对组间miRNA等进行差异表达分析，利用ggplot2进行可视化差异结果展示，包括散点图、火山图、热图。

e) 利用mirnada软件预测差异miRNA的靶基因，出具靶基因预测表格。

f) 对靶基因预测结果基于Gene Ontology(GO)和KEGG数据库进行注释及富集分析，提供富集可视化气泡图。

（4）数据分析和检索参考文献，选出潜在的分子标志物，为进一步扩大样本量进行基因筛选提供依据。

4、成果要求

（1）外泌体分离鉴定：

1）透射电镜对外泌体进行成像检测外泌体完整性，提供3张100nm、1张200nm、1张500nm、1张1000nm图片结果；

2）粒径分析，提供外泌体颗粒直径大小的数据，判断是否符合外泌体大小；

3）提供外泌体鉴定步骤，并说明所用的主要仪器，试剂或试剂盒。

（2）外泌体分离和miRNA抽提质检：

1）成熟的外泌体超速分离体系；

2）外泌体miRNA的抽提质检报告，包括Qubit检测浓度结果和Agilent Bioanalyzer 2100毛细管电泳图；RNA需达到10ng以上，片段需集中在100bp左右，无大片段污染。

3）提供数据交接表，包括送样编号、送样批次、样本交接日期、样本类型、是否成功分离外泌体；

4）提供外泌体分离步骤，并说明所用的主要仪器，试剂或试剂盒；

5）提供miRNA提取步骤，并说明所用主要仪器、试剂或试剂盒。

（3）外泌体miRNA测序：

1）带UMI的miRNA文库构建；

2）原始数据要求20M reads；数据要求达到目标数据量90%以上，交付数据质控Q20>90%。

3）反馈文库质检报告，原始数据质控文件；

4）提供测序数据生信分析结果；

5）提供数据交接表，包括送样编号、送样批次、样本交接日期、样本类型、是否成功测序、测序数据编号以及测序数据交接日期；

6）提供miRNA建库测序分析步骤，并说明所用主要仪器、试剂或试剂盒，以及建库流程和所用建库试剂盒、主要仪器；

7）承担我方后期一年内的数据信息分析工作咨询。

（4）完成服务后的1年内，提供后续数据分析相应的技术支持和培训，并解答实验与分析过程中的技术问题。

（5）在合同期内，单独安排人员可以在24小时内响应招标单位联系人，并解决相关问题。

商务需求★

注意：提供项目服务期限（完成期限）、项目进度安排、付款方式、验收要求、培训要求、售后服务要求。

1、服务期限：从合同签订之日起75日历天（2.5个月）。

2、项目进度安排：（详见附件2）

3、验收要求

（1）考核方式：以两种考核方式进行，一是我方定期组织相关项目负责人对服务方提供的服务进行讨论和反馈，并且提交考核结果；二是现场考核，由我方定期组织项目负责人到服务方实验室、标本贮存室进行考核。

（2）考核标准：（详见附件3）

依据每项检测项目的服务标准分别制定，每项检测项目满分为100分，每当服务标准（见上表）中有一项不符合，则扣除该项在检测项目中所占的比重的分值；例如人血全外显子测序中有5条服务标准，有一项不合符则扣除1*/5*100=20分；两种考核方式评分各占考核总评分的50%。

（3）考核结果使用：

考核结果将用于项目服务费支付和项目终止依据；当该检测项目的考核总评分在80分以上，每低1分，则该检测项目的支付费用将降低1%；若总评分低于80%，则该检测项目作废，并且服务方应承担相应违约责任；若合同中的50%的检测项目作废时，该合同（检测包）作废，并且服务方应承担相应的违约责任。

4、项目管理要求：

（1）要求提供检测项目实验室检测方案和指控方案、标本运输和储存方案；

（2）整个检测项目包应该制定严格的SOP文件进行质量控制（包括样本接收、运输、保存、检测、结果反馈等流程），实验后提供采购方；

（3）整个检测项目包应严格按照工作要求和服务标准执行，并由慢病院制定双方认可的考核方案，定期对项目的执行效果和管理标准进行考核；

（4）服务方应为检测包中不同的检测项目指定联系人，便于项目开展。

5、保密要求：

（1）保密内容：包括数据和技术信息。

（2）涉密人员范围：项目涉及的相关人员。

（3）保密期限：永久，且不因签订合同的无效、被撤销、终止而失去效力。

（4）泄密责任：承担因此造成采购方的全部损失。

6、所有权与知识产权：

项目开发所形成的相关成果，包括技术文档、著作权、专利申请权、专利权、技术秘密及其他相关知识产权归属采购方。

7、投标报价要求：

（1）供应商应根据本企业的成本自行决定报价，但不得以低于其企业成本的报价投标，各供应商在报价时，应充分考虑投标报价的风险。

（2）供应商的投标报价，应是本项目需求范围上所列的各项内容中所述的全部，以供应商在提出的综合单价或总价为依据，供应商不得期望通过索赔等方式获取补偿，

（3）供应商的报价不得超过最高限价。

8、付款方式：

（1）按合同价进行支付。

（2）合同签订后20个工作日内，采购方向供应商支付合同总价70%的款项，项目完成验收后支付剩余30%的款项。

1

外泌体分离（超离）

18

血浆样品超速离心方法分离外泌体

2

透视电镜检测

9

外泌体鉴定

3

粒径检测

9

外泌体鉴定

4

miRNA抽提质检

18

外泌体miRNA抽提和质检等

5

外泌体miRNA测序

18

外泌体miRNA带UMI文库构建，上机测序，数据生信分析等

血浆外泌体分离

18例

1个月

外泌体鉴定

9例

miRNA抽提、质检和miRNA测序

18例

1.5个月

外泌体分离鉴定

1）采用超速离心机分离外泌体；2）透射电镜检测外泌体完整性，提供3张100nm、1张200nm、1张500nm、1张1000nm图片结果：3）粒径分析外泌体大小 50-150um； 4）保证在20个工作日内返回检测结果。

使用国际成熟应用的超速离心平台，透射电镜，粒径分析仪，并提供方案SOP文件

外泌体分离和miRNA抽提质检

1）采用超速离心机分离外泌体；2）miRNA的Qubit检测浓度结果和Agilent Bioanalyzer 2100毛细管电泳图；3）保证在20个工作日内返回检测结果。

用国际成熟应用的超速离心平台，miRNA质检平台，并提供方案SOP文件

外泌体miRNA测序

1）带UMI的miRNA文库构建；2）原始数据要求20M reads；3）反馈文库质检报告，原始数据质控文件；4）提供测序数据生信分析结果；5）血浆运送使用干冰。返还多余的RNA样品及血浆。6）外泌体miRN抽提质检后，20个工作日内返回测序数据及生信分析报告。

使用国际成熟应用的测序平台，并提供方案SOP文件

1

外泌体分离（超离）

18

2

电镜检测

9

3

粒径检测

9

4

RNA抽提

18

5

miRNA测序

18

费用合计：