深圳市南山区慢性病防治院单一来源采购征求意见公示

依照《深圳经济特区政府采购条例》第二十一条规定情形，深圳市南山区慢性病防治院申请“ 同型半胱氨酸关键代谢基因与脂蛋白相关磷脂酶A2主要基因甲基化调控缺血性脑卒中发病机制系列研究课题实施项目”拟采用单一来源方式采购，现将有关情况向潜在采购供应商征求意见:

采购项目名称：同型半胱氨酸关键代谢基因与脂蛋白相关磷脂酶A2主要基因甲基化调控缺血性脑卒中发病机制系列研究课题实施项目           

项目预算金额：47.83万元

采购项目描述：(内容、用途、数量、简要技术需求等)

项目名称：同型半胱氨酸关键代谢基因与脂蛋白相关磷脂酶A2主要基因甲基化调控缺血性脑卒中发病机制系列研究课题实施项目     

性能技术指标需求：

本项目包含主要内容如下：

1. 设计具体实验方案；

包括具体实验设计，人群入选标准，具体检测指标，具体实验方法。

2.  实验室检测；

包括血清学指标、DNA甲基化等实验室检测，采用焦磷酸测序法进行检测。人循环内皮祖细胞培养，检测细胞的增殖活性，分析细胞周期分布及细胞凋亡的变化等。

3. 数据处理；

包括数据录入、整理与分析，分析环境因素与DNA甲基化对缺血性脑卒中发病风险的交互作用等。

具体课题名称、金额与研究内容如下：

① MTHFR甲基化调控原发性高血压诱发缺血性脑卒中的机制研究（12.1860万）

利用焦磷酸测序法检测随访3年后157对新发缺血性脑卒中患者Hcy代谢关键酶基因MTHFR启动子区CpG岛DNA甲基化修饰状态(基线调查与队列研究血液样本库)。

使用去甲基化药物 5-氮-2’-脱氧胞苷对人内皮祖细胞进行去甲基化干预，运用焦磷酸测序法检测干预前后 MTHFR 启动子区 DNA 甲基化状态的变化。

采用循环酶法检测157对高血压患者的 Hcy 水平，同时分析MTHFR的DNA甲基化表达水平变化与Hcy水平之间的内在关系。

② MTHFR甲基化与环境因素对缺血性脑卒中易感性的作用研究（6.15万）

利用焦磷酸测序法检测120名新发缺血性脑卒中患者与匹配的120名对照组Hcy代谢关键酶基因MTHFR启动子区CpG岛DNA甲基化修饰状态。

采用 RT-PCR、Western blot 方法检测干预前后细胞中 MTHFR、mRNA 和蛋白质表达水平的变化，以及干预前后基因表达和恢复表达情况。

采用 MTT 法检测细胞的增殖活性，采用流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡的变化。

采用logistic回归筛选与缺血性脑卒中发生发展密切相关的环境因素(吸烟、饮酒、饮食、体育锻炼、情绪状态、高血压患病年限、降压药使用情况、BMI、收缩压、舒张压、血糖、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐等)，分析环境因素对MTHFR启动子区DNA甲基化状态的影响。

采用广义多因子降维法(GMDR)分析环境因素与MTHFR基因甲基化之间的交互作用对缺血性脑卒中的发病风险。

③ PLA2G7基因甲基化调控缺血性脑卒中发生的分子机制研究（17万）

检测队列研究前后140名高血压患者PLA2G7基因多态及其启动子区DNA甲基化水平，并分析其与Lp-PLA2的相关性；采用ELISA法检测Lp-PLA2浓度，分析PLA2G7基因多态、启动子区DNA甲基化修饰与Lp-PLA2的关联。

分析PLA2G7基因多态-环境、DNA甲基化-环境对IS的交互作用，构建IS的风险预测模型，验证基于PLA2G7基因对IS作用的完整病因链条；

细胞水平开展Lp-PLA2基因甲基化修饰的功能验证，评价启动子区DNA甲基化状态变化对细胞周期、凋亡、侵袭、增殖的影响。人循环内皮祖细胞体外培养，用不同浓度的(5 ul, 10 ul, 15 ul)去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine, 5’-AZA-CdR) 处理细胞，对比药物处理组和对照组之间基因表达、PLA2G7基因启动子区DNA甲基化和细胞表型(细胞周期、凋亡、侵袭、增殖)的变化。

④蛋氨酸合成酶甲基化调控缺血性脑卒中发生的作用机制研究（12.5万）

采用焦磷酸测序法检测167名病例组和167名对照组的基线与随访结束时MS基因启动子区DNA甲基化修饰状态。

采用循环酶法检测167名病例组和167名对照组的基线与随访结束时血浆Hcy水平，同时分析MS基因DNA甲基化修饰与Hcy水平间的关联。

人循环内皮祖细胞体外培养，在培养基中加入不同浓度的Hcy，并孵育72h，用焦磷酸测序法分析MS基因启动子区域甲基化状态。

采用MTT法检测细胞的增殖活性，采用流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡的变化。

拟定供应商名单：宁波大学

申请理由及相关说明：　 

深圳市南山区慢性病防治院与宁波大学于2016年建立了“宁波大学——深圳市南山区慢性病防治院合作平台”，签订了为期5年的合作协议，并挂牌宁波大学——深圳南山慢病研究院。按照协议规定，双方按照“优势互补、互利共赢、协同创新、共同发展”的原则，致力于慢病预防、管理、发病机制等领域的研究工作，平台建立后，双方开展深入合作。在共建合作平台的过程中，甲方可委托乙方进行相关课题的设计、指标检测、数据分析等工作。深圳市南山区慢性病防治院充分发挥慢性病防控人群优势，借助宁波大学的科研资源和遗传实验室条件，成功申报了多项深圳市和广东省课题，并发表了系列论文，同时在宁波大学建立了脑卒中研究生物样本库。本采购项目涉及4项课题实施，包含3项市级和1项省级课题，在课题申报阶段，宁波大学参与了早期方案设计，其分子生物学实验室具备血液生物样本甲基化检测的实验条件和专业技术人员，并且与深圳市南山区慢性病防治院合作建立了脑卒中研究生物样本库，能够提供检测所需样本资源，并且减少因运输所造成的样本反复冻融、影响实验结果等问题。为了促进深圳市南山区慢性病防治院科研水平的提升和发展，促进“宁波大学——深圳市南山区慢性病防治院合作平台”协议的落实，以及本课题项目具有复杂性、专业性、特殊性等特点，选择宁波大学能够保证项目进展的延续性和质量可靠性。因此拟采取单一来源采购的方式采购该技术服务。

征求意见期限：从2018年9月3日起至2018年9月10日止

联系方式：

          采购人: 深圳市南山区慢性病防治院

         地址：深圳市南山区华明路7号

         联系电话：0755-86210576          传真：0755-26403044  

         监督部门：深圳市南山区慢性病防治院纪检

         地址：深圳市南山区华明路7号

         联系电话：0755-26648381         传真：0755-26403044

备注：潜在供应商对公示内容有异议的，请在公示期内以实名书面（包括联系人、地址、联系电话）形式将意见反馈至深圳市南山区慢性病防治院监督和采购部门。